Page 105 - 理化检验-化学分册2025年第三期

周江平，等：氯甲酸异丁酯衍生结合气相色谱-质谱法测定葡萄酒和黄酒中7种生物胺的含量

效液相色谱法等 [12-16] ，在GB 5009. 208—2016《食 剂延迟时间 12 min；流量 1. 0 mL · min −1 。柱升温
品安全国家标准 食品中生物胺的测定》中仅涉及液 程序：初始温度 80 ℃，保持1 min；以10 ℃ · min −1 的
相色谱法和分光光度法，其操作繁琐，检测时间长， 速率升温至270 ℃，保持2 min；以10 ℃ · min −1 的速
且不涉及气相色谱法。由于生物胺挥发性不强，不 率升温至280 ℃，保持3 min。
[7]
易气化 ，需要将生物胺转化成氨基甲酸酯类化合 1. 2. 2 质谱条件
物以便分析，如文献[17-18]采用氯甲酸正丙酯进行 电子轰击（EI）离子源；电离能量 70 eV；离子源
衍生试验，测定结果准确度高，灵敏度高，重现性好， 温度 230 ℃， 传输线温度 280 ℃，四极杆温度 150 ℃；
可同时测定多种生物胺。基于此，本工作采用分散 选择离子监测（SIM）模式。其他质谱参数见表1。
液液微萃取技术进行前处理，以氯甲酸异丁酯为衍 其中“*”代表定量离子。
生试剂，提出了气相色谱-质谱法同时测定葡萄酒和 表1 质谱参数
黄酒中7种生物胺[2-苯乙胺（2-PEA）、腐胺（PUT）、 Tab. 1 MS parameters
尸胺（CAD）、HIS、色胺（TRY）、酪胺（TYR）、章鱼 序号 生物胺及内标 保留时间/min 特征离子质荷比（m/z）
*
胺（OA）]含量的方法。 1 2-PEA 12. 95 91，130 ，221
*
2 PUT 17. 11 130，170 ，288
*
CAD
18. 08
3
130 ，143，302
1 试验部分
*
4 HIS 18. 47 182，194 ，311
*
1. 1 仪器与试剂 5 TRY 19. 43 130 ，143，260
*
6 TYR 19. 90 120，130 ，176
6890 GC-5973 MS型气相色谱-质谱联用仪；Multi 7 OA 20. 31 120，137 ，237
*
Reax型多位点涡旋振荡器；HC-3018型高速离心机； 8 1,7-DAP（内标） 19. 85 130，144，157 *
CP 1502 C型分析天平 （感量0. 01 g）；S210型pH计。 1. 3 试验方法
单标准储备溶液：取适量的生物胺标准品，用水 取1 mL葡萄酒或黄酒样品，加入100 μL内标溶
溶解并定容，混匀，配制成质量浓度为1.0 g·L −1 的 液、300 μL饱和碳酸氢钠溶液 （维持样品溶液pH在
单标准储备溶液。 9. 5~10. 0内）和0. 01 g PVPP，涡旋净化5 min，以
混合标准溶液：取适量的单标准储备溶液，用 转速 5 000 r · min − 1 离心 1 min，取 0. 5 mL上清液，
水稀释并定容，配制成 2-PEA、PUT、CAD、HIS、 加入衍生试剂氯甲酸异丁酯70 μL，室温涡旋反应
−1
TRY、TYR、OA的质量浓度均为50 mg · L 的混 5 min。加入100 μL乙醇、150 μL二氯甲烷，进一步
合标准溶液。 − 1
涡旋提取 5 min，以转速 5 000 r · min 离心 1 min，
内标储备溶液：取适量的 1，7-二氨基庚烷 取下层二氯甲烷提取液，经无水硫酸钠脱水后按照
（1，7-DAP）标准品，用水溶解并定容，混匀，配制成 仪器工作条件测定。
7
1，-DAP的质量浓度为1. 0 g · L −1 的内标储备溶液。
2 结果与讨论
内标溶液：取适量的内标储备溶液，用水稀释并
定容，配制成1，7-DAP质量浓度为50 mg · L −1 的内 2. 1 色谱行为
标溶液。 生物胺本身不容易气化，但伯胺、仲胺可以与氯
色胺盐酸盐、2-PEA、CAD、OA、酪胺盐酸盐 甲酸异丁酯发生衍生化反应，生成的氨基甲酸酯衍
等标准品的纯度均大于98%；腐胺盐酸盐、组胺盐 生物容易气化。5 mg · L −1 混合标准溶液中各单生
酸盐、1，7-DAP等标准品的纯度均大于99%；乙酸 物胺衍生物的总离子流色谱图见图1。
乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷均为色谱纯；氯甲酸异丁 由图1可知，7种生物胺的衍生物在DB-5MS毛
酯、碳酸氢钠、交联聚乙烯吡咯烷酮（PVPP）、 乙醇、 细管色谱柱上分离较好。
盐酸、氢氧化钠、氯化钠、无水硫酸钠等均为分析纯； 2. 2 特征离子的选择
试验用水为一级水。 对衍生物质谱进行解析，以确保获得的特征离
1. 2 仪器工作条件 子是目标化合物衍生产物的 [19] 。以HIS为例，其衍
1. 2. 1 色谱条件 生物通过质谱分析得到以下碎片离子m/z 311，238，
DB-5MS 毛细管色谱柱 （30 m×0. 25 mm， 194，182，138，94，82，57，如图2所示。
0. 32 μm）；进样口温度 220 ℃；载气为氦气（纯度 由图 2 可知， m/z 311 为HIS衍生物的分子离
+
不小于99. 999%）；进样体积 1 μL，不分流进样；溶 子[M] ， m/z 194为分子离子失去氨基甲酸异丁酯
• 339 •