Page 24 - 理化检验-化学分册2025年第三期

淳泽利，等：超高效液相色谱-串联质谱法同时测定雪上一支蒿中7种生物碱类化合物的含量

乌头碱、新乌头碱、次乌头碱、雪上一支蒿乙素、 乌头碱标准品（批号HS191115B1）、新乌头碱
苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头 标准品（批号HR1821S1）、次乌头碱标准品（批号
原碱均含有叔胺结构，因此在电喷雾离子源正离子 HS1821S1）、苯甲酰乌头原碱标准品（批号HS20116B1）、
（ESI ）模式下极易失去一个电子，检测响应很高。 苯甲酰次乌头原碱标准品（批号HR21O47B1）、苯甲
+
采用UHPLC-MS/MS测定乌头碱类化合物含量的 酰新乌头原碱标准品（批号HR17118S1）、雪上一支
报道很多 [16-19] ，但未见采用该方法同时测定雪上一 蒿乙素标准品（批号HR1113W1）的质量分数均不
支蒿中上述7种生物碱类化合物含量的报道。因此， 小于98%；乙腈、甲醇、甲酸均为色谱级；试验用水
本工作采用UHPLC-MS/MS同时测定雪上一支蒿 为超纯水。
中上述7种生物碱类化合物的含量。 试验所用雪上一支蒿样品均购于贵州省某
药材公司，经遵义医科大学基础医学院孟令杰博
1 试验部分
士鉴定为毛茛科乌头属植物短柄乌头Aconitum
1. 1 仪器与试剂 brachypodum Diels正品。
Waters Acquity UPLC I-Class型超高效液相色 1. 2 仪器工作条件
谱仪，配二元泵、在线真空脱气机、柱温箱、自动进 1. 2. 1 色谱条件
样器；Waters XEVO TQ-S 型三重四极杆质谱仪； Acquity UPLC BEH C 18 色谱柱（50 mm×2. 1 mm，
SB-5200DT型超声波清洗机；ME104E型分析天平； 1. 7 μm）；柱温40 ℃；进样量2 μL；流量0. 3 mL ·
PURELAB Chorus 2型纯水及超纯水系统。 min −1 ；流动相A为0. 1%（体积分数）甲酸溶液，B
单标准溶液：精密称取适量的雪上一支蒿乙素、 为乙腈。梯度洗脱程序：0~1. 0 min，B由10%升至
苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌 25%，保持2. 5 min；3. 5~3. 8 min，B由25%升至35%，
头原碱、新乌头碱、次乌头碱、乌头碱标准品，分别 保持1. 2 min；5. 0~5. 2 min，B由35%升至90%，保
用甲醇溶解并定容于10 mL容量瓶中，充分混匀，配 持1. 0 min；6. 2~6. 5 min，B由90%降至10%，保持
制成1 g·L −1 的单标准溶液，置于4 ℃环境中冷藏 1. 5 min。
备用。 1. 2. 2 质谱条件
+
混合标准溶液系列：分别精密移取1 g · L −1 的单 电喷雾离子（ESI）源，ESI 模式；多反应监测
标准溶液适量，用50%（体积分数，下同）甲醇溶液 （MRM）模式；离子源温度150 ℃；毛细管电压3. 5 kV；
逐级稀释，配制成7种生物碱类化合物的质量浓度均 去溶剂气流量750 L · h ，去溶剂气温度500 ℃；锥孔
−1
为1. 0，2. 5，5. 0，10. 0，25. 0，50. 0，100. 0 μg · L −1 气流量150 L · h −1 。其他质谱参数见表1，其中“*”
的混合标准溶液系列。 代表定量离子。
表1 质谱参数
Tab. 1 MS parameters
质荷比（m/z）
化合物 保留时间/min 锥孔电压/V 碰撞能量/eV
母离子 子离子
*
雪上一支蒿乙素 1. 25 438. 2 154. 2 ，356. 4 10 37，45
苯甲酰新乌头原碱 2. 17 590. 3 540. 2 ，105. 0 20 37，43
*
苯甲酰乌头原碱 2. 58 604. 3 554. 0 ，105. 0 25 37，45
*
苯甲酰次乌头原碱 2. 93 574. 3 542. 0 ，105. 0 35 33，43
*
*
新乌头碱 4. 51 632. 4 572. 4 ，105. 0 30 34，45
*
次乌头碱 4. 93 616. 4 338. 0 ，524. 0 25 41，42
乌头碱 4. 98 646. 3 586. 2 ，105. 0 15 35，40
*
1. 3 试验方法 甲醇溶液5 mL，密塞，称取质量，于25 ℃超声处理
取雪上一支蒿样品，剪碎，研磨成细粉，粉碎 20 min，放冷至室温，称取质量，用80%甲醇溶液补
后过 60 目（孔径 0. 25 mm）筛，称取粉末 0. 1 g，置 足减失质量，混合均匀，上清液用 0. 22 μm滤膜过
于 20 mL具塞试管中，加入 80%（体积分数，下同） 滤，即得供试品溶液Ⅰ，用于测定新乌头碱、次乌头
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