Page 16 - 理化检验-化学分册2024年第十二期
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刘子琪，等：液相色谱-高分辨质谱法定性定量检测血液透析器中3种未知可沥滤物


              100 mL容量瓶中，用水定容，制得DMAC、NMP、                       1. 3 试验方法
              2-Pyrol质量浓度分别为18. 78，10. 26，8. 96 mg · L    −1    1. 3. 1 水循环浸提
              的单标准中间液。                                               按各个血液透析器说明书要求使用水预冲透析
                  单标准溶液系列：取适量单标准中间液于10 mL                       器，预冲结束后将血路和透析液路中的液体泵出。
              容量瓶中，用水稀释，配制成DMAC质量浓度为                            在透析液路注满水后，密封透析液路端口，使用尽可
              0. 469 5，2. 347，4. 695，9. 390，18. 78 mg · L  − 1 ，  能短的管路连接蠕动泵，并外接锥形瓶，使两个血路
              NMP质量浓度为0. 102 6，0. 256 5，0. 513 0，2. 565，        端口形成闭路循环。将透析器置于37 ℃水浴中，启
              5. 130 mg · L  −1 ，2-Pyrol质量浓度为0. 089 6，0. 224，   动蠕动泵，使透析液以200 mL · min          −1 流量循环4 h。
              0. 560，2. 24，4. 48 mg · L  −1  的单标准溶液系列。          循环结束后，取透析器中全部水浸提液，量取其体积
                  DMAC对照品纯度为 99. 9%；NMP纯度大于                     进行定量计算。取同体积水，不接样品，同法制备空
              99. 8%；2-Pyrol纯度为99. 7%；乙醇为色谱纯；试验                 白对照。
              用水为纯化水。                                           1. 3. 2 乙醇-水混合溶液灌注浸提
                  血液透析器样品为临床应用的28种中空纤维膜                              血液透析器与血袋均在使用时处于血液环境，
              透析器，分别标记为样品1~28。                                  因此国家标准GB 14232. 1—2020《人体血液及血
                                                                                                          [15]
              1. 2 仪器工作条件                                       液成分袋式塑料容器 第1部分：传统型血袋》 采
              1. 2. 1 可沥滤物定性检测条件                                用乙醇-水混合溶液 （密度937. 3~937. 8 g · L         −1 ）作
                                                                为浸提溶剂于37 ℃浸提血袋，有相关研究也使用乙
                  采用LC-2040C型液相色谱仪联合LCMS-9030
              型Q-TOF四极杆-飞行时间质谱仪对样品中的可沥                          醇-水混合溶液浸提血液透析器               [16] 。因此，本方法采
              滤物进行定性分析。                                         用等密度范围的乙醇-水混合溶液灌注浸提透析器。
                                                                将乙醇-水混合溶液注满透析器后，密封血路、透析
                  色谱条件：HALO 90Å PFP填充柱（150 mm×
                                                                液路端口，将透析器置于37 ℃水浴中浸提5 h。浸提
              2. 1 mm，2. 7 μm）；柱温35 ℃；流动相为体积比95∶5
                                                                结束后，取透析器中全部乙醇-水浸提液，量取其体
                                                −1
              的乙腈-水混合溶液， 流量0. 3 mL · min ，等度洗脱；
                                                                积进行定量计算。取同体积乙醇-水混合溶液，不接
              进样体积10 μL；光电二极管阵列（PDA）检测器，检
                                                                样品，同法制备空白对照。
              测波长220 nm。
                  质谱条件：电喷雾离子（ESI）源；接口温度300 ℃；                   2 结果与讨论

              脱溶剂温度526 ℃； 雾化气流量3. 0 L · min ，加热气                2. 1 可沥滤物的定性分析
                                                   −1
                                                      −1
              流量10. 0 L · min ，干燥气流量10. 0 L · min ；检                 采用1. 2. 1节条件分析1. 3. 1节制得的不同血
                             −1
              测器调谐电压−0. 20 kV；飞行时间（TOF）开始质                      液透析器的水浸提液，发现有3个未知可沥滤物 （标
              荷比（m/z）50，结束m/z 500。                              记为未知可沥滤物 1、2、3），先采用 1. 2. 1 节中的
              1. 2. 2 可沥滤物定量检测条件                                PDA检测器对可沥滤物进行保留时间定位，再用质
                  采用LC-2040C型液相色谱仪联合LCMS/MS-                    谱检测器获得未知可沥滤物的质谱信息，利用这些
              8050型串联三重四极杆质谱仪对样品中的可沥滤物                          信息进行碎片解析，推测出未知物的可能结构，最后
              进行定量分析。                                           比对未知物与拟推测物对照品的色谱保留时间与质
                  色谱条件：进样体积 2 μL，其他色谱条件同                        谱裂解碎片，确认推测结果的正确性。
              1. 2. 1节。                                         2. 1. 1 未知可沥滤物1
                  质谱条件：多反应监测（MRM）模式；正极性                              在对透析器的水浸提液进行分析时，PDA检
              模式；DMAC的前体离子m/z 88. 20，产物离子m/z                    测器在保留时间约 2. 1 min处检出一种未知可沥
              47. 15 为定量离子，产物离子m/z 42. 15，46. 15 为              滤物[图 1(a)]，而质谱检测器得到的总离子流色谱
              定性离子；NMP的前体离子m/z 100. 15，产物离子                     图（TIC）的相同保留时间处也出现了信号响应
              m/z 59. 15为定量离子，产物离子m/z 58. 10，69. 15             [图1(b)]，说明该物质为血液透析器的溶出物质。
              为定性离子；2-Pyrol的前体离子m/z 86. 20，产物                        对未知可沥滤物1进行一级质谱 （图2）扫描，发
              离子m/z 44. 10 为定量离子，产物离子m/z 69. 10，                现该物质的基峰在m/z 88. 075 51处，最大碎片离子
              41. 15为定性离子。                                      峰在m/z 175. 144 21处。
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