Page 53 - 理化检验-化学分册2024年第十二期

黄晓姗，等：超高效液相色谱-串联质谱法同时测定抗骨增生片中41种消炎止痛类化合物的含量

三重四极杆质谱联用仪；XPR105型电子天平；Milli- 过0. 22 μm滤膜，滤液按照仪器工作条件测定。如
Q IQ7000型超纯水系统；KQ-500VDE型超声波清 果样品中某一化合物检出量超过线性范围，需要用
洗器。 50%甲醇溶液进行适当稀释， 重新进样分析。
单标准储备溶液：精密称取41种化合物的标准
2 结果与讨论
品，用50%（体积分数，下同）甲醇溶液溶解和稀释，
2. 1 提取溶剂的选择
配制成1 000 mg · L −1 的单标准储备溶液。
试验分别考察了甲醇、50%甲醇溶液、乙腈、
混合标准储备溶液：分别吸取41种化合物的单
50%（体积分数，下同）乙腈溶液、乙醇和 50%（体
标准储备溶液适量，用50%甲醇溶液稀释，配制成
积分数，下同）乙醇溶液对加标样品（加标量均为
含甲基泼尼松龙约1. 5 mg · L −1 、其余40种化合物 −1
100 μg · L ）中41种化合物的提取效果。结果显示：
约4 mg · L −1 的混合标准储备溶液。 以乙腈、50%乙腈溶液、乙醇和50%乙醇溶液提取
双嘧达莫、盐酸噻氯匹定、替格瑞洛、阿司匹林、
时，部分化合物（保泰松、西咪替丁）的回收率偏低，
对乙酰氨基酚、甲芬那酸、吲哚美辛、萘普生、芬布
均在60. 0%以下；以甲醇提取时，阿司匹林在甲醇
芬、奥沙普秦、吡罗昔康、保泰松、氨基比林、安替比
中的稳定性较差，配制5 h后回收率下降了30%。因
林、非那西丁、萘丁美酮、尼美舒利、塞来昔布、罗通
此，试验选择50%甲醇溶液作为样品的提取溶剂。
定（延胡索乙素）、西咪替丁、奥美拉唑、曲安西龙、
2. 2 色谱条件的选择
泼尼松龙、氢化可的松、可的松、倍他米松、地塞米
试验比较了以甲酸溶液、甲酸铵溶液、乙酸铵
松、氟米松、曲安奈德、泼尼松龙醋酸酯、氟米龙、氢
溶液为水相，甲醇、乙腈为有机相时对加标样品（加
化可的松醋酸酯、地夫可特、泼尼松醋酸酯、可的松 −1
标量均为100 μg · L ）中41种化合物的分离效果。
醋酸酯、甲基泼尼松龙醋酸酯、布地奈德、舒林酸、 − 1
结果显示：和其他体系相比，5 mmol · L 乙酸铵
甲基泼尼松龙、倍他米松醋酸酯、地塞米松醋酸酯标
溶液-乙腈体系洗脱所得各化合物响应强度、峰形
准品纯度均不小于97%；乙腈为质谱纯；甲醇、乙酸
均较好。在乙酸铵溶液中添加低浓度水平的甲酸，
铵和甲酸为色谱纯；试验用水为超纯水。
有助于促进目标化合物的离子化，增加信号强度。
1. 2 仪器工作条件
经过反复优化，试验最终确定的流动相为乙腈-含
1. 2. 1 色谱条件 −1
5 mmol · L 乙酸铵的0. 1%甲酸溶液体系。
Welch Ultimate UHPLC XB-C 18 色谱柱 （100 mm× 试验所测化合物有41种，为了达到较好的分离
2. 1 mm，1. 8 μm）；柱温 40 ℃；进样量 2 μL；流量 效果，应尽量减少共流出基质的干扰，试验采用了梯
0. 3 mL · min − 1 ；流动相A为含 5 mmol · L − 1 乙酸 度洗脱联合适当延长洗脱时间的方式，当洗脱时间
铵的0. 1%（体积分数，下同）甲酸溶液，B为乙腈。 达到35 min后，干扰基质共流出的现象减少，部分化
梯度洗脱程序：0~5 min，A为 95%；5~10 min，A 合物如保泰松和西咪替丁的回收率有一定提升；针
由95%降至70%；10~30 min，A由70%降至50%； 对倍他米松与地塞米松这类母离子和子离子相同的
30~32 min，A由50%降至30%，保持3 min。 同分异构体，缓慢调节有机相比例有利于实现二者
1. 2. 2 质谱条件 的色谱分离。优化后的色谱条件见1. 2. 1节。
电喷雾离子（ESI）源；正（ESI ）、负（ESI ） 2. 3 质谱条件的选择
−
+
离子扫描模式；多反应监测（MRM）模式；电离电 将 100 μg · L − 1 单标准溶液针泵进样，调整一
压 5 500 V；气帘气压力 20. 0 psi（137. 9 kPa），碰 级质谱参数，在 ESI 和 ESI 模式下分别进行 full
−
+
撞气压力 9 psi（62 kPa），辅助加热气压力 40 psi MS 扫描（Q1 Scan），比较两种模式下各目标化合
（275. 8 kPa），干燥气压力40 psi（275. 8 kPa）；离子 物的响应强度，并选择响应强度较高、背景干扰较
化温度450 ℃。其他质谱参数见表1，其中“*”为定 小的离子作母离子进行产物离子扫描（Product Ion
量离子。 Scan），比较并记录子离子响应强度，选择响应较强
1. 3 试验方法 的两个子离子作定量和定性离子，并在MRM模式
取样品20片，除去包衣后研细，精密称取粉末 下优化碰撞能量和去簇电压。优化后的质谱参数
1 g，加入50%甲醇溶液25 mL，在水温不超过60 ℃ 见表1。
的条件下超声处理30 min，取出放冷，充分振摇混匀， 混合标准溶液的叠加提取离子色谱图见图1。
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