Page 47 - 理化检验-化学分册 2021年第六期

赵清佳, 等: 在线固相萃取 Ｇ 超高效液相色谱 Ｇ 串联质谱法测定尿液中芬太尼及其代谢物的含量

加 １０ μ g L －１ MXEＧd ３ 内标溶液 ４ μ L , 混匀, 加入 切换至 ６Ｇ１ , 用前处理泵的流动相洗脱固相萃取小
p H９．２的２mmol L 甲酸铵溶液 ２００ μ L 稀释, 涡 柱, 此时目标物被选择性地保留和纯化; ２~４ min
－１
旋３０s后, 以转速 １３０００r min 离心 １０min .移 时, 六通阀切换至 ２Ｇ１ , 此时分析泵与在线固相萃取
－１
取上清液２００ μ L 置于进样小瓶中, 单次上样５０ μ L . 小柱成串联模式, 以分析泵的初始流动相将目标物
移取空白尿样 １８０ μ L 至 ２．０mL 离心管中, 分 从固相萃取小柱洗脱至分析柱上; ４min 开始, 再次
别添加２０ μ L 混合标准溶液系列, 配制成加标样品, 将六通阀切换至 ６Ｇ１ , 用前处理泵清洗、 再生固相萃
其余步骤同上. 取小柱, 用分析泵分离目标物.整个程序由 XcalibuＧ
将上述制备的样品加至固相萃取小柱上, 前处 lar软件控制自动完成.在线固相萃取 Ｇ 超高效液相
理泵和分析泵同时开启工作. ０~２min 时, 六通阀 色谱 Ｇ 串联质谱( UHPLCＧMS / MS ) 的流路图见图１ .

( a ) 位置 ６Ｇ１ : 进样和富集样品 ( b ) 位置 ２Ｇ１ : 洗脱和转移样品
图 １ 在线固相萃取 Ｇ 超高效液相色谱 Ｇ 串联质谱的流路图
Fi g ．１ Dia g ramofonＧlineSPEcombinedwithUHPLCＧMS / MS

１．３．２ 动物试验 ９．２ 的 ２ , ５ , １０ mmol L 的甲酸铵溶液为淋洗液
－１
试验动物: S p ra g ueDawle y SD ) 大鼠, 雄性, 质 清洗基质中极性较强的杂质.芬太尼和去甲芬太尼
(
量 ２００~２３０g . 在采用不同淋洗液时的响应值见图 ２ .
药液配制: 移取１．００g L 的芬太尼标准储备
－１

溶液 ４０ μ L 至 １５ mL 的微量离心管( EP 管) 中, 加

０．９％ 氯化钠溶液至 １０ mL , 配制成 ４ m g L －１ 的
溶液.

给药方法: SD 大鼠 ３ 只, 分别以 ２０ μ g k g －１
的给药剂量尾静脉注射给药.
样本收集: 给 药 后, 分 别 于 ０ , ２ , ４ , ２４ , ４８ , ７２ ,
９６ , １２０ , １４４ , １６８ , １９２ , ２１６ , ２４０ , ２６４ , ２８８ , ３１２ , ３３６ ,
３６０ , ３８４ , ４０８ , ４３２ , ４５６ , ４８０ , ５０４ , ５２８ , ５５２ , ５７６ , ６００ , a－p H７．０ 的 ２mmol L －１ 甲酸铵溶液;
６２４ , ６４８ , ６７２h 收集尿液样本, 编号, 置于 －４０ ℃ 的 b－p H７．０ 的 ５mmol L －１ 甲酸铵溶液;
冰箱冷冻保存. c－p H７．０ 的 １０mmol L －１ 甲酸铵溶液;
d－p H９．２ 的 ２mmol L －１ 甲酸铵溶液;
２ 结果与讨论 e－p H９．２ 的 ５mmol L －１ 甲酸铵溶液;
－１ 甲酸铵溶液
f－p H９．２ 的 １０mmol L
２．１ 前处理泵的淋洗液及淋洗时间的选择 图 ２ 目标物在采用不同淋洗液时的响应值
由于目标物是碱性化合物, 为了抑制离子化效 Fi g ．２ Res p onsevaluesofthetar g etcom p ounds
应, 同时减少淋洗过程中目标物的流失, 试验分别以 b yusin gdifferenteluants
－１
p H７．０ 的 ２ , ５ , １０mmol L 的甲酸铵溶液和 p H
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