Page 46 - 理化检验-化学分册 2021年第六期
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赵清佳, 等: 在线固相萃取 Ｇ 超高效液相色谱 Ｇ 串联质谱法测定尿液中芬太尼及其代谢物的含量


                                                     溶液( 作为淋洗液).梯度淋洗程序见表 １ .
  １  试验部分
                                                                表 １  前处理泵的梯度淋洗程序
   １．１  仪器与试剂                                             Tab．１ Gradientelutionp ro g ramfor p reＧ p rocess p um p
       ThermoUltiMate３０００ 型双三元超高效液 相                                             φ ％
                                                                                  /
                                                          t /
   色谱系统; TSQ Altis型三重四极杆质谱仪, 配电喷                          min
                                                                       A          B          C
   雾离子源( ESI ); E pp endorfAG 型离心机; Talbo y s
                                                          ０．００         ０          ０         １００
   型数显 型 漩 涡 混 合 器; BRANSON B３５００SＧMT 型
                                                          ２．００         ０          ０         １００
   超声波清洗器.
                                                          ２．１０       １００          ０           ０
       标准储备溶液: 称取芬太尼和去甲芬太尼的对
                                                          ６．００       １００          ０           ０
   照品粉末 １０ m g 用甲醇溶解并稀释, 分别 定容至
                  ,
                                                          ６．１０         ０        １００           ０
                                              
   １０mL 容量瓶中, 配制成质量浓度均为１．００g L                 －１
                                                          ８．００         ０        １００           ０
   的芬太 尼 标 准 储 备 溶 液 和 去 甲 芬 太 尼 标 准 储 备
                                                          ８．１０         ０          ０         １００
   溶液.
                                                         １５．００         ０          ０         １００
       混合标准溶液: 移取芬太尼和去甲芬太尼的标
   准储备溶液适量, 用甲醇逐级稀释, 分别配制成质量                            ２ )色 谱 条 件     [ １４ ]   Thermo Fisher H yp ersil
   浓度为 １ m g L 、 １０ μ g L 和 １００n g L 的               GOLDC １８ 分析柱( １００ mm×２．１ mm , １．９ μ m ); 柱
                             
                 
                  －１
                                             －１
                                           
                              －１
   混合标准溶液.                                           温５０ ℃ ; 进样量 ５０ μ L ; 流量 ０．４mL    min ; 分析
                                                                                            －１
       混合标准溶液系列: 移取一定质量浓度的混合                         泵的流动相 D 为含 ２ mmol    L        －１  甲酸铵和 ０．１％
   标准溶液适量, 用甲醇逐级稀释, 配制成质量浓度为                         ( 体积分数, 下同) 甲酸的水溶液; F 为含 ２ mmol   
            －１
          
                              
   ２０n g L 、 １ , ２ , ４ , ６ , ８ μ g L －１ 的混合标准溶液      L 甲酸铵和 ０．１％ 甲酸的甲醇溶液.梯度洗脱程
                                                       －１
   系列.                                               序: ０~４．００min 时, D 为 ９０％ ; ４．００~６．００min 时,
       ２Ｇ ( ３Ｇ 甲氧基 苯 基) Ｇ２Ｇ ( 乙 基 氨 基) 环 己 酮 盐 酸     D 由 ９０％ 降 至 ６５％ , 保 留 ４．００ min ; １０．００~
   盐 Ｇd ３ MXEＧd ３ 内标储备溶液: 称取 MXEＧd ３ 对照
        (
                )
                                                     １２．００min时, D 由 ６５％ 降 至 ３５％ ; １２．００ ~
   品粉末 １０m g 用甲醇溶解, 转移至 １０ mL 容量瓶                    １２．５０min时, D 由 ３５％ 升至 ９０％ , 保留 ２．５０min .
               ,
   中, 用甲醇定容, 配制成质量浓度为 １．００g L 的                          ３ )质谱条件     [ １４ ]  ESI , 正离子模式, 选择离子
                                             －１
                                           
   MXEＧd ３ 内标储备溶液.                                   监测( SRM ) 模式; 离子传输管温度 ３２５ ℃ , 雾化器
       MXEＧd ３ 内标溶液: 用甲醇稀释 MXEＧd ３ 内标                温度 ３２５ ℃ ; 鞘气流量 １２L    min , 辅助气 流 量
                                                                                     －１
                                            －１  的             －１
   储备 溶 液, 配 制 成 质 量 浓 度 为 １０ μ g          L         ８L    min .表 ２ 列出了目标物和内标物的质谱
   MXEＧd ３ 内标溶液.                                     参数.
       甲酸铵溶液: ２mmol    L , 分别以甲酸和氨水                                   表 ２  质谱参数
                             －１
   调节 p H , 配制 p H４．２ , ７．０ , ９．２ 的 ２ mmol    L 的                   Tab．２ MSp arameters
                                             －１
   甲酸铵溶液.                                                     保留时间 /    质荷比( m / z )  碰撞电压 / 透镜电压 /
                                                       化合物
       所有溶液在使用前均保存在 ４ ℃ 的冰箱中.                                   min   母离子     子离子      V       V
       芬太尼、 去甲芬太尼对照品的纯度大于 ９９％ ;
                                                     去甲芬太尼     ７．７９   ２３３．０８８  ８４．０５４  １８．３８  ４３．３４
   MXEＧd ３ 对照品的纯度大于 ９９．５％ ; 甲醇、 甲酸和甲
                                                                             １７７．１５５  １６．０３
   酸铵均为色谱纯; 氨水为分析纯; 超纯水由 Purelab
                                                      MXEＧd ３  ８．０２   ２５１．１２５ １２４．０００  ３０．３６  ３９．４５
   Ultra超纯水机制备.
                                                                             ２０６．１２５  １４．８９
   １．２  仪器工作条件
                                                       芬太尼     ９．９３   ３３７．２５０ １８８．１３７  ２３．２３  ６５．０３
       １ )在线固相萃取条件  WatersOasisHLB 固
                                                                             ２１６．１５５  ２２．５５
   相萃取小柱( ２０mm×２．１mm , ２５ μ m ); 柱温２０℃ ;
   进样量 ５０ μ L ; 流量 ０．４mL    min ; 前处理泵的流             １．３  试验方法
                                 －１
   动相 A 为甲醇, B 为水( 甲醇和水用来活化、 平衡固                     １．３．１  样品制备和在线固相萃取
   相萃取小柱), C 为 p H９．２ 的 ２mmol    L 甲酸铵                    移取尿液样品 ２００ μ L 至 ２．０mL 离心管中, 添
                                         －１
       ５ １ ２
   41   42   43   44   45   46   47   48   49   50   51