Page 48 - 理化检验-化学分册 2021年第六期
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赵清佳, 等: 在线固相萃取 Ｇ 超高效液相色谱 Ｇ 串联质谱法测定尿液中芬太尼及其代谢物的含量


       结果表明: 固相萃取小柱在 ６ 种淋洗液条件下
   均 能 很 好 地 萃 取 到 目 标 物. 但 以 p H ９．２ 的
   ２mmol    L 甲酸铵溶液为淋洗液时, 目标物具有
             －１
   更优的峰形和更高的响应值, ５ μ g L 的尿液加标
                                     －１
                                   
   样品 中, 芬 太 尼 和 去 甲 芬 太 尼 的 响 应 值 分 别 为
   ５．８８×１０ 和 ５．０８×１０ . 因 此, 选 择 p H ９．２ 的
           ６
                        ６
             －１
   ２mmol    L 甲酸铵溶液作为淋洗液.
       将通过在线固相萃取小柱后的废液直接连接至
                                                           图 ３  目标物在不同酸度的样品稀释液下的响应值
   质谱检测器, 发现采用该淋洗液进行淋洗, ５min 内
                                                           Fi g ．３ Res p onsevaluesofthetar g etcom p oundsin
   色谱图无目标物出峰, 说明无目标物的流失.设置
                                                                dilutesolutionsatdifferentacidit y
   为全扫描模式, 发现在 ２min 前有杂质出峰, ２ min
   后无其他杂峰出现, 表明该淋洗液在 ２ min 内足以                       本, 并按试验方法进行处理分析, 检测背景响应, 结
   将基质中的杂质清洗干净, 因此将淋洗时间设置为                           果显示空白样品中目标物和内标物均无干扰.芬太

   ２min .                                            尼、 去甲芬太尼和内标 MXEＧd ３ 的保留时间分别为
   ２．２  洗脱程序的选择                                                                     －１ 的 质 控 样 品 及
                                                                                  
                                                     ９．９４ , ７．７９ , ８．０２ min , ４００n g L
       为了快速将目标物转移至分析柱, 减少谱带的
                                                               －１
                                                             
                                                     ２００n g L 的 MXEＧd ３ 内标溶液的色谱图见图 ４ .
   展宽, 试验采用反冲的方式将目标物转移至分析柱.
   试验发现, 分析流路的初始流动相即可将所有目标
   物洗脱至分析柱.将流路中的分析柱拆去, 用两通
   替代, 色谱出峰时间在 ３．６min 内, 据此可以确定阀
   切换的时 间 应 该 略 晚, 因 此 将 阀 切 换 时 间 设 置 在
   ４min时切换固相萃取小柱, 确保目标物全部进入
   分析流路.然后以分析泵的流动相对分析柱上的目

   标物进行梯度洗脱, 同时前处理泵对在线固相萃取
   小柱进行清洗再生、 活化和平衡, 二者互不干扰, 缩
   短了分析时间.通过上述色谱条件与阀切换时间的
   优化后, 目标物可获得较好的分离效果.
   ２．３  样品稀释液的酸度的影响
       正常新鲜尿液的 p H 为 ４．５~７．９ , 而试验中的
   目标物为碱性物质, 因此有必要考察样品稀释液的
   酸度对目标物测定 的 影 响.试 验 分 别 采 用 p H 为
   ４．２ ( 酸性), ７．０ ( 中性), ９．２ ( 碱性) 的２mmol    L 甲
                                             －１
   酸铵溶液作为样品稀释液, 考察了其萃取效果的影
   响.芬太尼和去甲芬太尼在不同酸度的样品稀释液

   下的响应值见图 ３ .
       结果表明: SPE 色谱柱在不同酸度的样品稀释
                                                                 图 ４  目标物和内标物的色谱图
   液下均能很好地萃取到芬太尼和去甲芬太尼.相比
                                                            Fi g ．４ Chromato g ramsofthetar g etcom p ounds
   之下, 使用碱性样品稀释液时, 目标物解离减少, 更                                        andinternalstandard
   多的保留在固相萃取小柱上, 因而具有更高的响应
   值.因此, 选择 p H９．２ 的２mmol    L 甲酸铵溶液                      仪器通过高含量样品后进空白样品来估计色谱
                                     －１
   作为样品稀释液.                                          柱的残留情况.结果表明, 通过高含量样品后, 芬太
   ２．４  方法的专属性                                       尼不存在残留; 去甲芬太尼有少量残留但通过 １ 针
       收集 ６ 份来自不同健康志愿者的空白尿 液样                        空白样品清洗后可以消除.

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