Page 45 - 理化检验-化学分册 2021年第六期

DOI : １０．１１９７３ / lh jy Ｇhx２０２１０６００６

在线固相萃取 超高效液相色谱 串联质谱法
Ｇ
Ｇ
测定尿液中芬太尼及其代谢物的含量

赵清佳 １ , ２ ,汪 蓉 ,徐智儒 ,盛振海 ,梁 晨 ,张玉荣 ２∗
２
２
１
２
( １． 中国医药工业研究总院 创新药物与制药工艺国家重点实验室,上海 ２０００４０ ;
２． 上海市公安局物证鉴定中心, 上海市现场物证重点实验室,上海 ２０００８３ )
摘 要:建立了在线固相萃取( onＧlineSPE ) Ｇ 超高效液相色谱 Ｇ 串联质谱法( UHPLCＧMS / MS )
测定尿液中芬太尼及其代谢物去甲芬太尼的方法, 并将该方法运用于大鼠尿液中芬太尼及其代谢
物的检测时限研究.将尿液用 p H９．２ 的 ２mmol L 甲酸铵溶液稀释, 离心后直接进样.采用
－１
OasisHLB 固相萃取小柱通过在线固相萃取富集净化目标物, 用 p H９．２ 的 ２mmol L 甲酸铵
－１
溶液淋洗, 以分析泵的初始流动相将目标物洗脱至 H yp esilGOLDC １８ 分析柱上, 以不同体积比的
－１ －１
含有 ２mmol L 甲酸铵和 ０．１％ ( 体积分数) 甲酸的甲醇溶液、 含有 ２mmol L 甲酸铵和 ０．１％
( 体积分数) 甲酸的水溶液的混合液为流动相进行梯度洗脱.串联质谱分析中采用电喷雾正离子源
( ESI ) 和选择离子监测( SRM ) 模式检测.将芬太尼以 ２０ μ g k g 的给药剂量对大鼠尾静脉注

＋
－１
射后进行尿液收集, 考察原体和代谢物的检测时限.结果表明: 芬太尼和去甲芬太尼的质量浓度在
２．０~８００n g L 内与其峰面积呈线性关系, 检出限均为 ０．２００n g L , 测定值的相对标准偏差

－１
－１
( n＝５ ) 均小于 １５％ .在大鼠尿液中芬太尼原体的检测时限为 ５~７d , 而其代谢物去甲芬太尼的检
测时限长达 ２８d .
关键词:超高效液相色谱 Ｇ 串联质谱法;在线固相萃取;芬太尼及其代谢物;检测时限
中图分类号: O６５７．６３ 文献标志码: A 文章编号: １００１Ｇ４０２０ ( ２０２１ ) ０６Ｇ０５１１Ｇ０８
芬太尼是强效的 Ｇ 阿片受体激动剂, 其镇痛作 生物检材基质复杂, 常常存在内源性杂质的干扰, 为
μ
用是吗啡的 ８０ 倍, １５min起效, 维持 ２h , 可产生欣 了延长色谱柱和仪器的使用寿命, 提高目标物的检
快、 呼吸抑制, 大剂量产生肌肉僵直, 用于各种原因 出限, 在分析样品之前需要前处理.样品前处理常
引起的疼痛, 但长期使用具有成瘾性.芬太尼的消 用的 方 法 有 液 液 萃 取 法 ( LLE ) 、 固 相 萃 取 法
[ １０ ]
除半衰 期 ( t １ / ２ 较 短, 以 １０ μ g k g 的 剂 量 给 药 ( SPE ) 和蛋白质沉淀法( PP ) 等.其中 LLE 和
[ １１ ]
[ １２ ]
)

－１
时, 大鼠血液中的t １ / ２ 为 ３．７２h .体内吸收后, 尿 PP 均存在耗时长、 溶剂需求量大、 污染环境等缺点,
[ １ ]
液中芬太尼的原体或代谢物的浓度通常高于血液中 PP 还会 对 色 谱 柱 造 成 一 定 程 度 的 损 坏.而 对 于
的浓度, 因此通过检测尿液中的原体或代谢物来判 SPE 研究显示 [ １３ ] , 提供同样良好的检出限、 准确度
断吸食者的吸毒史, 具有更高的参考价值, 但目前对 和精密度的情况下, 离线 SPE 需要手动活化、 缓冲
芬太尼代谢物检测时限的报道相对较少. 和淋洗等步骤, 过程复杂.
芬太尼主要在肝脏中被 CYP４５０ 酶迅速代谢, 本工作 旨 在 开 发 一 种 在 线 固 相 萃 取 ( onＧline
去甲芬太尼为其主要的代谢物 [ ２Ｇ３ ] .目前, 生物检材 SPE ) 的前处理方法对尿液中的芬太尼和去甲芬太
中芬太尼的检测方法有均相免疫测定法 [ ４Ｇ５ ] 、 气相色 尼进行富集净化, 建立一种前处理与检测全自动化
谱 Ｇ 质谱法 [ ６Ｇ７ ] 、 液相色谱 Ｇ 串联质谱法 [ ８Ｇ１０ ] 等.由于 的方法, 同时将该方法用于研究芬太尼原体及其代
谢物去甲芬太尼在大鼠体内的检测时限.该方法溶
剂消耗少, 人力需求低, 且操作简便易行, 可满足公
收稿日期: ２０２１Ｇ０２Ｇ２６
作者简介:赵清佳, 硕士研究生, 研究方向为毒物分析
安及司法部门对该物质监控的需求.
∗ 通信联系人. y r _ zhan g ＠１２６．com

５ １ １