Page 118 - 理化检验-化学分册2024年第十二期

李亚茹，等：离子色谱-脉冲安培检测器法同时测定酵母发酵液中4种糖类物质的含量

瓶中，立即用氮气保护。该溶液可使用7 d。 Minitab17. 0软件。
1 mol · L −1 乙酸钠溶液：取42 g乙酸钠，用水稀 2 结果与讨论
释至500 mL，用真空抽滤装置抽滤后，将溶液转移
至2 L的塑料淋洗液瓶中，立即用氮气保护。该溶液 2. 1 固相萃取小柱的优化
酵母发酵液样品成分复杂，不仅会对待测物的
可使用7 d。
测定产生干扰，而且会造成色谱柱和检测器的污
半乳糖标准品的纯度不小于99%；葡萄糖标准
染 [26] 。采用离子色谱法检测时，常用的前处理方法
品的纯度为99. 7%；蔗糖标准品的纯度为99%；果
为固相萃取法，固相萃取小柱有银柱、钠柱、C 18 柱等。
糖标准品的纯度不小于 99%；乙酸钠的纯度大于
银柱主要用于去除样品中的卤素化合物，钠柱主要
99. 9%；试验用水符合GB/T 6682—2008《分析实
用于去除样品中存在的金属离子，C 18 柱主要用于去
验室用水规格和试验方法》一级水的规定。
除样品基质中的有机大分子化合物。酵母发酵液主
酵母发酵液样品由安琪酵母股份有限公司提
要含有蛋白质、纤维素、胶体物质等，均属于有机大
供，是酵母完成发酵过程之后的液体；将上述样品经
分子化合物，因此试验采用C 18 固相萃取小柱净化，
10 000 r · min −1 转速离心10 min分离处理后获得上
以有效减小基体成分对测定的干扰。
清液。
2. 2 色谱条件的优化
1. 2 色谱条件
氢氧化钠溶液和乙酸钠溶液常作为离子色谱
TM
CarboPac PA20色谱柱（分析柱尺寸150 mm×
3 mm，保护柱尺寸30 mm×3 mm），柱温均为30 ℃； 法检测糖类物质的流动相，只采用氢氧化钠溶液-
水体系梯度洗脱时，色谱图基线不平，如图1（a）所
− 1
流量 0. 4 mL · min ；进样量 25 μL。脉冲安培检
示；采用氢氧化钠溶液-乙酸钠溶液-水体系梯度洗
测器：Au工作电极，Ag/AgCl 参比电极，四电位波
脱时，色谱图基线较为平稳，4种糖类物质的分离度
− 1
形。流动相A为250 mmoL · L 氢氧化钠溶液，B
相对更高，如图1（b）所示。因此，试验选择采用氢
−1
为1 moL · L 乙酸钠溶液，C为水，梯度洗脱条件
氧化钠溶液-乙酸钠溶液-水体系作流动相，并分别
见表1。
在0. 3，0. 4，0. 5 mL · min −1 流量下梯度洗脱4种糖
表1 梯度洗脱条件 −1
Tab. 1 Gradient elution conditions 类物质。结果显示：在0. 5 mL · min 流量下，4种
糖类物质的分离度较低；在0. 3，0. 4 mL · min −1 流
时间/min φ A /% φ B /% φ C /%
量下，4种糖类物质的分离度均能达到1. 5以上，且
0 2. 4 0 97. 6
0. 4 mL · min −1 流量下4种糖类物质的色谱分离时
18. 0 2. 4 0 97. 6
间较短，因此试验选择在此流量下进行色谱分离。
18. 1 41. 6 40. 0 18. 4
试验进一步考察了柱温分别为25，30，35 ℃时
28. 0 41. 6 40. 0 18. 4
对4种糖类物质分离效果的影响，结果发现4种糖类
28. 1 80. 0 0 20. 0
物质的分离效果没有明显差异，因此试验选择常使
35. 0 80. 0 0 20. 0
用的柱温30 ℃进行色谱分离。
35. 1 2. 4 0 97. 6
2. 3 方法学考察
40. 0 2. 4 0 97. 6
2. 3. 1 标准曲线、检出限和测定下限
1. 3 试验方法 按照色谱条件测定混合标准溶液系列，以各糖
取0. 5 g（精确至0. 1 mg）酵母发酵液样品，用 类物质的质量浓度为横坐标，其对应的峰面积为纵
水定容至 50 mL。分别将 5 mL甲醇和 10 mL水过 坐标绘制标准曲线，线性参数见表2。
C 18 固相萃取小柱，放置10 min，充分平衡后用注射 用水配制 0. 1 mg · L − 1 混合标准溶液，并用水
器以流量 4 mL · min − 1 将样品溶液注入C 18 固相萃 逐级稀释，按照色谱条件上机测定，以3，10倍信噪
取小柱，弃去前3 mL样品溶液，收集后续流出液，过 比（S/N）对应的质量浓度作检出限（3S/N）和测定
0. 22 μm水相针式滤膜， 按照色谱条件测定。 下限（10S/N），结果见表2。
1. 4 数据处理 由表 2 可知，4 种糖类物质的检出限为 0. 01~
色谱积分与结果处理采用Thermo Chromeleon 7 0. 03 mg · L −1 ，较文献[27-28]采用高效液相色谱法
软件，数据统计和数据分析采用 Excel 软件和 获得的检出限低。
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