Page 113 - 理化检验-化学分册2024年第十二期

郑国建，等：柱前衍生-二维液相色谱法测定氨基酸配方婴幼儿配方奶粉中牛磺酸的含量

表1 二维液相色谱梯度洗脱程序
Tab. 1 Gradient elution program of two-dimensional liquid chromatography
四元泵1 四元泵2
时间/min φ A1 /% φ B1 /% 时间/min φ A2 /% φ B2 /%
0 40 60 0 50 50
8. 00 40 60 7. 00 50 50
8. 01 0 100 17. 00 0 100
14. 00 0 100 19. 00 0 100
14. 01 40 60
19. 00 40 60
2 结果与讨论 32

2. 1 衍生条件的选择
由于牛磺酸结构简单，没有共轭结构，本身无法 28
产生特征紫外吸收和荧光信号 [16] ，在进行液相色谱 峰面积
分析时需要先衍生化生成具有紫外吸收或荧光响应 24
的衍生产物后再进行检测。牛磺酸常用的衍生试剂
有丹磺酰氯、OPA、9-芴基甲氧羰基化合物（FMOC） 20
2.0 3.0 4.0
等，其中丹磺酰氯活性较低，需要较长的反应时间， 衍生试剂用量与样品上清液分取量比值
如GB 5009.169—2016 第二法采用丹磺酰氯衍生 图 1 不同衍生试剂用量下牛磺酸衍生产物的峰面积
反应时需要在避光条件下反应2 h，检测效率较低； Fig. 1 Peak areas of taurine derivatives at different amounts of
derivative reagents
OPA具有活性高、反应快等特点，但是衍生产物不
稳定，需要严格控制反应时间，对操作要求非常高 [17] ； 磺酸充分衍生化，试验选择的衍生试剂用量与样品
FMOC具有反应迅速、产物稳定等特点。因此，试 上清液分取量的比值为3. 5。
验选择FMOC作为衍生试剂。 延长反应时间一般可以提高产率，试验比较了
目前商品化的FMOC试剂包括FMOC-Cl和 衍生1，20，40，60，360，1 440 min时牛磺酸衍生产
FMOC-OSu，反应所用的缓冲溶液包括 50 g · L − 1 物的峰面积。结果表明，随着反应时间的延长，色谱
四硼酸钠溶液 [18] 和pH 8. 0 的0. 3 mol · L − 1 硼酸溶 峰面积基本不变，说明衍生反应迅速且牛磺酸衍生
液 [14] 。试验以氨基酸配方婴幼儿配方奶粉为待测样 产物在24 h内稳定。考虑到添加了衍生试剂的样品
品，比较了上述衍生试剂和缓冲溶液两两组合的衍 只需涡旋混匀10 s后就可以进行后续操作，试验选
生效果，结果显示4种组合方式的衍生结果没有差 择的衍生时间为10 s。
别。考虑到试剂成本和操作便利性，试验选择的衍 一般情况下，升高衍生温度可以加快衍生反应

生试剂为含20 g · L −1 FMOC-OSu的乙腈溶液，缓 的速率和提高产率，试验比较了分别在室温，40，
冲溶液为50 g · L −1 四硼酸钠溶液。 60 ℃衍生时牛磺酸衍生产物的峰面积。结果显示，
由于样品中的氨基酸会和牛磺酸共同竞争 不同衍生温度下的牛磺酸衍生产物峰面积没有显著
FMOC-OSu，为了保证牛磺酸完全衍生化，对衍生 变化，进一步说明衍生反应迅速 [19] 。试验选择在室
试剂用量进行了优化。控制样品上清液分取量为 温下进行衍生化反应。
− 1
120 μL，考察了含 20 g · L FMOC-OSu的乙腈溶 2. 2 色谱条件的选择
液的用量分别为样品上清液分取量的2. 0，2. 5，3. 0， 2. 2. 1 流动相水相
3. 5，4. 0倍时对牛磺酸衍生产物峰面积的影响，结 基于多种分离机理的多维色谱法被越来越多的
果见图1。 用于复杂基质中目标化合物的分离和定量检测 [20-23] ，
由图1可知， 当衍生试剂用量与样品上清液分取 其中二维色谱法结构相对简单，对设备要求不高，
量比值不小于3. 0时，牛磺酸衍生产物峰面积较大 已广泛应用于食品分析 [8，24] 。由于流动相水相的酸
且趋于稳定，说明牛磺酸已衍生完全。为了保证牛 度对牛磺酸的电离程度影响较大且会进一步影响其
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