Page 112 - 理化检验-化学分册2024年第十二期
P. 112
12
知识与经验 DOI：10. 11973/lhjy-hx220767
柱前衍生-二维液相色谱法测定氨基酸配方
婴幼儿配方奶粉中牛磺酸的含量
郑国建，俞所银，林毅侃
（上海市质量监督检验技术研究院，上海 200233）
中图分类号：O657. 7 文献标志码：B 文章编号：1001-4020(2024)12-1306-05
牛磺酸是人体含量最丰富的游离氨基酸之一， 牛磺酸标准溶液系列：准确取适量牛磺酸标准
广泛分布于体液和生物组织中 。牛磺酸具有促进 储备溶液，用水逐级稀释，配制成质量浓度为1，2，5，
[1]
智力发育 、提高免疫力 、改善变应性炎症 、预防 10，20 mg · L −1 的牛磺酸标准溶液系列。
[3]
[4]
[2]
[5]
心血管疾病 等作用。牛磺酸的测定方法主要包括 牛磺酸、甲酸、三氟乙酸、甲醇、乙腈为色谱纯；
[6]
分光光度法 、液相色谱法 [1，7-9] 和液相色谱-串联质 FMOC-Cl、FMOC-OSu、亚铁氰化钾、乙酸锌、十水
谱法 [10-11] 。分光光度法特异性差、灵敏度低，不适用 合四硼酸钠为分析纯；试验用水为超纯水，由超纯水
于食品中牛磺酸的测定；液相色谱-串联质谱法仪器 仪制备。
价格昂贵。食品中牛磺酸含量较高，主要采用液相 1. 2 色谱条件
色谱法测定。但是，牛磺酸没有紫外吸收基团，往往 第一维色谱柱，Agilent EC-C 18 柱（100 mm×
需进行衍生化反应后再进行测定。常用的衍生试剂 4. 6 mm，2. 7 μm）；第二维色谱柱，Agilent全氟苯基
包括邻苯二甲醛（OPA） 、丹磺酰氯 [8，13] 、9-氯甲酸 (PFP)柱（100 mm×4. 6 mm，2. 7 μm）；柱温 35 ℃；
[12]
芴甲酯（FMOC-Cl） 等。国家标准GB 5009.169— 第一维色谱柱使用流动相A1、B1，第二维色谱柱使
[14]
2016 [13] 第二法采用的衍生化方法为丹磺酰氯柱前衍 用流动相A2、B2，阀切换时间 6. 1~7. 0 min；流动
[15]
生法，该标准等同采用AOAC 997. 05 ，而AOAC 相A1、A2均为0. 1%（体积分数，下同）三氟乙酸溶
997. 05中明确说明该方法不适用于含水解蛋白配方 液，流动相B1为甲醇，流动相B2为乙腈；流动相A1
这类含游离氨基酸的基质的测定。鉴于此，本工作 和B1比例由四元泵1调节，流动相A2和B2比例由
参考GB 5009.169—2016第二法进行提取，9-芴甲 四元泵 2 调节，泵 1 流量 0. 4 mL · min − 1 ，泵 2 流量
基-N-琥珀酰亚胺基碳酸酯（FMOC-OSu）进行柱前 0. 5 mL · min −1 ，泵1和泵2的梯度洗脱程序如表1所
衍生，二维液相色谱法测定氨基酸配方婴幼儿配方 示；进样量5 μL；紫外检测器，检测波长为265 nm。
奶粉中牛磺酸的含量，该方法具有准确度高、重复性 1. 3 试验方法
好、操作简便等优点。 参照GB 5009. 169—2016 第二法进行样品提
1 试验部分 取。准确称取 1 g样品(精确到 0. 1 mg)于 50 mL
离心管中，加入 30 mL水，涡旋 10 s，放入超声振
1. 1 仪器与试剂
荡器中，超声提取 10 min。加入 1. 0 mL 15%（质
1260型高效液相色谱仪，配有自动进样器、柱
量分数）亚铁氰化钾溶液，涡旋混合，加入1. 0 mL
温箱、两台四元泵、紫外检测器和六通阀；Eppendorf
30%（质量分数）乙酸锌溶液，涡旋混合后转移
5804 型离心机；WiggensVotex 3000 型涡旋振荡
至 50 mL容量瓶中，用水定容，充分混匀，以转速
仪；MX104/A型电子天平；Millipore Milli-Q型超纯
水仪。 8 000 r · min −1 离心3 min。
准确吸取120 μL上清液、420 μL 50 g · L −1 四硼
−1
牛磺酸标准储备溶液：1 000 mg · L ，精密称
−1
酸钠溶液、420 μL 含20 g · L FMOC-OSu的乙腈溶
取 10 mg牛磺酸，用水溶解并定容至 10 mL，摇匀 −1
备用。 液于10 mL离心管中， 涡旋10 s，以转速8 000 r · min
离心3 min，上清液过0. 22 μm尼龙滤膜，滤液按照
收稿日期：2022-11-07 色谱条件测定。
• 1306 •
