Page 54 - 理化检验-化学分册 2021年第六期

钟慈平, 等: 高效液相色谱法测定食用油中抗氧化剂的国家标准方法的优化研究

至 ６２．０％ ~１０４％ , 分 离 度 满 足 要 求, 其 结 果 令 人 ２５．００~２８．１０ min 时, B 由 ９５％ 降 至 ５％ , 保 持
满意. １．９０min .
１．３ 试验方法
１ 试验部分
１．３．１ 样品提取
１．１ 仪器与试剂 称取试样 １．０００g 置于 ５０ mL 离心管中, 加入
A g ilent１２６０ 型 高 效 液 相 色 谱 仪; MULTIＧ ５mL 乙 腈 饱 和 的 正 己 烷 溶 液 溶 解 样 品, 涡 旋
FUGEX３R 型离心机; T２５Di g ital型 涡 旋 振 荡 仪; １min , 用１０mL 正己烷饱和的乙腈溶液( 含０．１g
－１
N１型氮吹仪; MLＧ２０４ 型电子天平( 感量 ０．００１g ); L －１ AP ) 涡旋提取 ２min , 以转速 ６０００r min 离
/
C １８ 固相萃取柱( ５００m g６mL ). 心 ５ min , 收 集 乙 腈 层 置 于 试 管 中, 再 重 复 使 用
抗氧化剂标准储备溶液: ２０００m g L , 称取 １０mL 正己烷饱和的乙腈溶液( 含 ０．１g L －１ AP )

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提取 ２ 次, 合并 ３ 次提取液, 待净化.同时做空白
BHA 、 BHT 、 OG 、 DG 、 PG 、 NDGA 、 THBP 、 TBHQ
和IonoxＧ１００ 等 ９ 种抗氧化剂标准品各 ２０．００ m g , 试验.

分别置于 １０ mL 棕色容量瓶中, 用含 ０．１g L －１ １．３．２ 样品净化
AP 的 乙 腈 溶 液 定 容,配 制 成 质 量 浓 度 为 用甲醇 ５ mL 活化 C １８ 固相萃取 柱, 再 用 乙 腈

２０００m g L －１ 的 抗 氧 化 剂 标 准 储 备 溶 液, 于 ５mL 平衡, 弃去流出液.将上述合并的 提 取 液 倾
入 C １８ 固相萃取柱中, 用体积比 ２∶１ 的乙腈 Ｇ 甲醇混
－１８ ℃ 避光保存.
抗氧化剂混合标准溶液: ２００m g L , 分别移 合液 ５mL 洗脱, 收集上样时的流出液和洗脱液置
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取上述 ９ 种抗氧化剂标准储备溶液各 １mL 置于同 于试管中, 于４０℃ 氮吹至近干, 用含０．１g L －１ AP

一 １０mL 容量瓶中, 用含 ０．１g L －１ AP 的乙腈溶 的乙腈溶液 ２mL 定容, 经 ０．２２ μ m 有机滤膜过滤,
液定容, 摇匀, 配制成质量浓度为２００m g L 的抗 按仪器工作条件进行测定.
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氧化剂混合标准溶液, 现配现用. ２ 结果与讨论

抗氧化剂混合标准溶液系列: 将 ２００ m g L －１
２．１ GB５００９．３２－２０１６ 第一法的试验结果

抗氧化剂混合标准溶液用含 ０．１g L －１ AP 的乙腈
参照 GB５００９．３２－２０１６ 第一法的样品提取净
溶液逐级稀释, 配制成质量浓度分别为 ２．００ , ５．００ ,
化过程和高效液相色谱条件进行空白基质( 阴性食
１０．０ , ２０．０ , ４０．０ , ８０．０m g L 的抗氧化剂混合标准
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用油) 加标试验, 考察了该方法下 ９ 种抗氧化剂的分
溶液系列, 现配现用.
离效果( 图 １ ), 并计算得到 ９ 种抗氧化剂的加标回
乙腈饱和的正己烷溶液: 取 ８００mL 正己烷, 加
收率.
入 ２００mL 乙腈, 摇匀静止后取上层即得.
正己烷饱和的乙腈溶液: 取 ８００mL 乙腈, 加入
２００mL 正己烷, 摇匀静止后取下层即得.
食用油购自某市场.
BHA 、 BHT 、 OG 、 DG 、 PG 、 NDGA 、 THBP 、
TBHQ 和 IonoxＧ１００ 标准品的纯度均不小于 ９８％ ;
AP 为分析纯; 甲醇、 正己烷和乙腈为色谱纯.
１．２ 仪器工作条件
图 １ 采用 GB５００９．３２－２０１６ 第一法时
A g ilentEcli p se XDBＧC １８ 色 谱 柱 ( ２５０ mm ×
９ 种抗氧化剂的色谱图
４．６mm , ５ μ m ); 柱温 ３５ ℃ ; 进样量 １０ μ L ; 检测波
Fi g ．１ Chromato g ramof９antioxidantsb y thefirst
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长 ２８０nm ; 流量 １ mL min ; 流动相 A 为 ０．１％
methodofGB５００９．３２－２０１６
( 体积分数, 下同) 甲酸溶液, B 为乙腈.梯度洗脱程
序: ０~４．００min时, B 为５％ ; ４．００~１２．００min时, B 结果显示: 在完全采用 GB５００９．３２－２０１６ 第一
由 ５％ 升至 ６０％ ; １２．００~２２．００min时, B 由 ６０％ 升 法的色谱柱和流动相洗脱程序情况下, PG 峰形较
至 ７５％ ; ２２．００~２５．００min时, B 由 ７５％ 升至 ９５％ ; 差, THBP 峰和 TBHQ 峰 未 能 达 到 基 线 分 离, DG

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