Page 23 - 理化检验-化学分册 2021年第六期

李登昆, 等: 固相萃取 Ｇ 气相色谱 Ｇ 串联质谱法测定牛奶中 ９ 种 NＧ 亚硝胺的含量

２ 结果与讨论 用质量浓度为 ２５ μ g L －１ 的混合标准溶 液, 结 合
GCMSＧTQ８０４０ 软件的 SmartMRM 功能自动优
２．１ 仪器工作条件的选择 化目标组分的母离子、 子离子、 碰撞能量及采集时
气相色谱法分析测定 NＧ 亚硝胺类化合物时常 间等.
用强极性色谱柱, 笔者在文献[ ２ ] 中已进行过探讨, ９ 种 NＧ 亚硝胺及 ２ 种同位素内标的质谱参数
本试验仍采用 VFＧWAXms色谱柱作为分析柱.选 见 １．２ 节, MRM 扫描的总离子流色谱图见图 １ .

图 １ ９ 种 NＧ 亚硝胺及 ２ 种同位素内标的总离子流色谱图
Fi g ．１ Totalionchromato g ramsofthe９NＧnitrosaminesand２isoto p einternalstandards

２．２ 样品前处理条件的选择 沉淀法沉淀剂使用量大, 高速离心后上清液过多, 不
２．２．１ 蛋白沉淀剂 利于进一步的除脂除杂操作; 乙腈沉淀法不仅能获
牛奶样品基质成分复杂, 富含蛋白质、 脂肪、 磷 得较好的蛋白沉淀效果, 在加入过量的氯化钠后由
脂及碳水化合物等, 会造成仪器系统污染.为降低 于盐析作用, 还能进一步沉淀乳清蛋白等杂质.因
基质干扰、 提高目标待测物的分析测定灵敏度, 牛奶 此, 试验在 １０．０g 牛奶样品中加入 １０．０ mL 乙腈,
样品应进行蛋白沉淀及净化处理 [ ９Ｇ１０ ] , 常用的蛋白 超声波振荡１０min后, 在冷冻离心机中于４℃ 冷藏
－１
沉淀剂为亚铁氰化钾 Ｇ 乙酸锌、 ３％ ( 体积分数, 下同) ５min , 再以转速 １００００r min 离心 ５ min 进行
乙酸溶液及乙腈等 [ １１ ] .但文献[ １２ ] 认为亚铁氰化 牛奶蛋白沉淀.
钾 Ｇ 乙酸锌作为蛋白沉淀剂引入了大量金属离子, 会 ２．２．２ 样品净化小柱
干扰试验结果; 文献[ １３ ] 通过试验比对发现 ３％ 乙 牛奶样品中磷脂、 脂肪等复杂成分, 不仅会污染
酸溶液沉淀效果不理想且不利于进一步上机测定; 色谱系统、 干扰目标物的分析测定, 也会增加维护成
而文献[ １４ ] 采用乙腈沉淀蛋白测定乳及乳制品中硝 本、 降低仪器使用寿命 [ １７ ] . EMRＧLi p id 净化技术基
酸盐和亚硝酸盐, 文献[ １５ ] 以乙腈作为蛋白沉淀剂 于体积排阻和疏水相互作用机制, 可高选择性去除
与提取剂测定牛奶中 １１ 种真菌毒素残留量, 均获得 样品中的脂质 / 基质 [ １８ ] , OasisPRIME HLB 可以选
良好的加标回收率及精密度, 同时文献[ １６ ] 发现牛 择吸附去除样品中蛋白质、 盐、 磷脂等基质干扰物而
奶样 品 与 乙 腈 体 积 比 为 １∶１ 时, 超 声 波 振 荡 不影响目标物的回收率 [ １９ ] , 两款固相萃取柱都适合
１０min并于４ ℃ 低温冷藏沉淀１０min , 可以获得最 净化磷脂 / 脂质含量较高的样品.按试验方法, 分别
大程度沉淀效果. 用 Ca p tiva EMRＧLi p id 固 相 萃 取 小 柱 与 Oasis
本试验中发现, 亚铁氰化钾 Ｇ 乙酸锌沉淀法固形 PRIME HLB 固相萃取小柱处理同一牛奶样品, 对
物较多, 难以分离出足够量的上清液; ３％ 乙酸溶液 比两款固相萃取小柱的净化效果.结果显示, 采用

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