Page 29 - 理化检验-化学分册2024年第十二期
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王 溪，等：大气压气相色谱-串联质谱法测定食用油中37种脂肪酸的含量


                  液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）测定脂                       标准储备溶液储存于−18 ℃冰箱中。
              肪酸含量的研究已有报道，例如：文献[19]通过LC-                             FAMEs 标准溶液 A、B、C 系列：取一定量
              MS/MS测定ω-3系列的5种多不饱和脂肪酸的含量；                        FAMEs标准储备溶液A、B、C，用正庚烷逐级稀释，
              文献[20]通过LC-MS /MS测定血浆中的ω-6和ω-3                    配制成质量浓度为0. 5，1，2，5，10，20，50 mg · L          −1
              系列的多不饱和脂肪酸含量。但是，气相色谱-串联                           的 FAMEs 标准溶液 A 系 列，1，2，4，10，20，40，
              质谱法（GC-MS/MS）同时测定食用油中多种脂肪                         100 mg · L  −1 的FAMEs标准溶液B系列，1. 5，3，6，
              酸含量的研究却鲜有报道，可能原因为该方法常用                            15，30，60，150 mg · L  −1  的FAMEs标准溶液C系列。
              离子源为电子轰击离子（EI）源，属于硬电离模式，                          临用现配。
              在和GC联用分析脂肪酸甲酯 （FAMEs，为了增加脂                             37种FAMEs标准品的纯度均大于99. 0%；甲
              肪酸的挥发性和热稳定性，常用甲基酯衍生化方法                            醇、正庚烷、三氟化硼甲醇为色谱纯；氢氧化钠、氯化
              衍生脂肪酸生成FAMEs来测定）时，FAMEs很容                         钠、无水硫酸钠为分析纯；试验用水为瓶装纯净水。
              易被EI源打碎，产生大量碎片，易造成分子离子或                                样品为在南京某大型超市购买的橄榄油、菜籽
              准分子离子峰丢失。为提高分子离子或准分子离子                            油、猪油、玉米油、核桃油等5种食用油，于−4 ℃冰
              的响应，提高方法的灵敏度，应采用软电离模式                     [21-22]    箱保存。
              进行电离。大气压气相色谱-串联质谱法采用了独                            1. 2 仪器工作条件
              特的软电离模式，可以显著减少碎片化离子，得到                            1. 2. 1 色谱条件
              高丰度的分子离子峰，已用于二  英、多氯联苯、农                               CD-2560 毛细管色谱柱 （100 m×0. 25 mm，
              药等的分析      [23-24] 。鉴于此，本工作提出了一种灵敏、               0. 20 μm）；进样器温度240 ℃，辅助气温度240 ℃；
              准确地测定食用油中37种脂肪酸 （GB 5009. 168—                    载气为氦气，纯度为99. 99%；补偿气为氮气，纯度
              2016《食品安全国家标准 食品中脂肪酸的测定》中
                                                                为 99. 99%；分流进样，分流比为 30∶1；进样体积
              规定的脂肪酸）含量的方法，并进行了方法学考察
                                                                1 μL。柱升温程序：初始温度120 ℃，保持5 min；以
              和食用油样品的分析，验证了该方法的可靠性和实                                         −1
                                                                速率3 ℃ · min     升温至240 ℃，保持20 min。色谱
              用性。
                                                                分析总时间65 min。
              1 试验部分                                            1. 2. 2 质谱条件

              1. 1 仪器与试剂                                             大气压气相色谱电离源，正离子模式；离子
                                                                源温度150  ℃；MRM模式；碰撞气为氩气，纯度为
                  7890B型气相色谱仪；Xevo TQ-XS型质谱仪；
              MS205DU 型电子天平；尼龙有机相针式滤膜                           99. 99%；辅助气为氮气，纯度为 99. 99%；电晕针
             （13 mm×0. 22 μm）；利用Masslynx软件采集数据，                 电流 10 μA；锥孔气流量 200 L · h        − 1 ，辅助气流量
                                                                        −1
                                                                                                  −1
              Microsoft Excel 2010 软件对数据进行统计分析，                 300 L · h ，碰撞气流量0. 15 mL · min ；雾化气压
              Origin 9. 0软件作图。                                  力 400 kPa；扫描范围  质荷比（m/z）50~500；37 种
                  FAMEs标准储备溶液A、B、C：取一定量的                        FAMEs的其他质谱参数见表1，其中“*”为定量离子。
              FAMEs标准品，用正庚烷溶解和稀释，配制成各                           1. 3 试验方法

              FAMEs的质量浓度分别为200，400，600 mg · L           −1  的        参考GB 5009. 168—2016进行样品前处理。称
              37种FAMEs标准储备溶液A、B、C。其中：FAMEs                      取1 g（精确至0. 001 g）混合均匀的食用油样品于平
              标准储备溶液B为含丁酸甲酯 （C4∶0，以脂肪酸简                         底烧瓶中，加入含2%（质量分数）氢氧化钠的甲醇
              称表示，下同）、己酸甲酯（C6∶0）、辛酸甲酯（C8∶0）、                    溶液8 mL，连接回流冷凝器，在（80±1） ℃水浴中加
              癸酸甲酯（C10∶0）、十二碳酸甲酯（C12∶0）、十四碳                     热回流至油滴消失。在回流冷凝器上端加入7 mL
              酸甲酯（C14∶0）、十八碳酸甲酯（C18∶0）、顺-9-十八                   15%（体积分数）三氟化硼甲醇溶液，在（80±1） ℃
              碳一烯酸甲酯（C18∶1n9c）、二十碳酸甲酯（C20∶0）、                   水浴中继续加热回流2 min，用少量水冲洗回流冷凝
              二十二碳酸甲酯（C22∶0）、二十四碳酸甲酯（C24∶0）                     器。停止加热，将烧瓶迅速冷却至室温。准确加入
              的混合标准溶液；FAMEs标准储备溶液C为十六碳                          10 mL正庚烷，振摇2 min，再加入3 mL饱和氯化钠
              酸甲酯（C16∶0）标准溶液；FAMEs标准储备溶液A                       溶液，静置分层。吸取上层正庚烷提取溶液5 mL至
              为含其余FAMEs的混合标准溶液。将上述FAMEs                         25 mL试管中，加入3 g无水硫酸钠，振摇1 min，静
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